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쐃R与RT-PCR的探秘之旅 쥜觔物技术的广阔天地里,PCR与RT-PCR都是不可或缺的工具。最近,我深入探索了这两种技术,尤其是RT-PCR,它究竟有何魅力呢? ᩦ先,RT-PCR与PCR的融合,使得在单个EP管中就能完成逆转录和聚合酶链式反应,这无疑大大简化了操作步骤。然而,这一步也带来了不小的挑战。每次转录一个RNA分子就需要消耗一个逆转录酶,这无疑增加了实验的成本和复杂性。 在NCBI的网站上,我找到了许多关于RT-PCR的详细资料。虽然我在理解引物设计方面还有一些疑惑,比如如何选择合适的exon-exon进行设计,以及克隆时如何间接设计引物等。但我相信,随着不断的探索和学习,这些难题都将迎刃而解。 ꦀ来说,RT-PCR以其独特的优势在生物技术领域占据了一席之地。虽然它的一些缺点也让实验者头疼不已,但正是这些挑战激发了我们的探索欲望。 PS:在学习之余,也别忘了欣赏一下美丽的风景,比如《铃芽之旅》中的美景,它们也能给我们的心灵带来愉悦和放松哦!
如何设计qPCR引物:实用指南 大家好!今天我们来聊聊如何设计qPCR(定量PCR)的引物。其实,qPCR的引物设计和普通PCR差别不大,都可以用NCBI来方便地设计。不过,由于qPCR鉴定的是mRNA的表达,所以在设计引物时需要特别注意以下几点: 第一步:打开NCBI 首先,打开NCBI(美国国立生物技术信息中心)网站,搜索你需要的基因(例如Lepr)。 第二步:找到基因卡片 点开基因卡片,找到最下方的mRNA和Protein描述。根据你的需求选择合适的Isoform,然后复制NM码。 第三步:进入引物设计页面 在NCBI的引物设计(Primer design)栏目输入刚才复制的NM码。我个人更喜欢下载cDNA文件,然后用SnapGene手动拉取引物,这样可以直接看到cDNA序列,更加直观。 第四步:确认引物CG值 在SnapGene中确认引物的CG值(大约50%),Tm值在60度左右。可以多设计几对引物,以防有些引子不工作。 希望这些小技巧能帮到大家,祝科研顺利!ꀀ
网络药理学分析药物靶点:从基因到PCR 大家好,我现在遇到了一点小麻烦,希望有经验的朋友能帮我解答一下。老师让我结合网络药理学来分析药物的潜在靶点,具体来说,就是要在PubMed上搜索这些靶点相关的基因。可是,我用genecard搜索的时候,出来的结果都是基因,而不是老师希望的靶点。我是不是理解错了老师的意图?我现在要做PCR,但不知道该怎么做,求大家指导一下! 根据老师的指示,我需要先通过网络药理学分析找出最可能的靶点,然后结合这些靶点分子的文献,挑选出10个基因。接下来就是做PCR了,订引物的时候,网上有很多引物设计网站,大家有没有推荐的? 希望有经验的朋友能帮我解答一下,真的很急!
如果研一的时候,有人告诉我这些就好了 嘿,大家好!今天想跟大家分享一些我在研究生期间发现的宝藏工具,真的是科研路上的好帮手。如果有人在我研一的时候告诉我这些,估计我的科研之路已经成功一半了! 1⃣️ 分子生物学软件:SnapGene 首先推荐的是SnapGene,这个软件真的是分子生物学实验员的必备神器。举个例子,以前设计一对引物需要花二十分钟,还得反复比对,生怕出错。现在有了SnapGene,一分钟就能设计出5对引物,效率提升不是一点点。 2⃣️ 数据分析软件:GraphPad 和 Origin 接下来是数据分析软件。GraphPad Prism8和Origin是我常用的两款。特别是GraphPad,做科研汇报和论文作图简直必备。以前我只会用Office作图,质量差不说,放到PPT上还不清晰,经常要改来改去。现在有了GraphPad,作图效率和质量都大大提升。 3⃣️ 修图排版软件:PS和AI 然后是修图和排版软件。Adobe Photoshop和Illustrator真的是绝配。论文图片的排版、修图微调都可以用这两个软件搞定。我自己写论文的时候,也是借助这两个软件进行排版设计的,方便又高效。 4⃣️ 实验protocol查询网站 最后分享几个靠谱的实验protocol查询网站。Bio-protocol支持中文,很多protocol都是中文的,非常好用。Nature Protocols、Cold Spring Harbor Protocols、JOVE视频教程、Current Protocols和ProtocolExchange都是非常权威的网站,基本上在实验室里导师没时间教你,师兄师姐不一定会的小技巧都能在这些网站上查到。 文献阅读小技巧 最后给大家一些文献阅读的小技巧: 文献查找分类:知网、谷歌学术、SCI-Hub、Web of Science、Pub Med等都是常用的检索工具。 文献泛读:先检索100-200篇相关文献,一般只看abstract部分,然后用有道翻译提炼重点,筛出20-30篇精读。 文献精读:先看abstract掌握主要思路,再看result了解作者观点,最后找出创新点,得到属于自己的ideas。 希望这些小工具和小技巧能帮到大家,让你们的科研之路少走弯路!如果你们有其他好用的软件或者工具,也欢迎在评论区分享哦!
쥼物设计全攻略✨ 打开PubMed网站,点选NIH,开始你的基因探索之旅! ᠩ择“Gene”,输入你心仪的目的基因,比如mouse、rat或human哦~ 点击基因名字,进入下一步,别急! 点击NCBI,连接世界基因库,轻松获取信息。 在mRNA and protein区域,找到并点击第一个序号。 𛃄S,进入关键步骤,别错过! 复制棕色序列,一定要全部复制,这是关键数据哦! 打开生工网站,选择技术服务-常规引物合成,开始你的引物设计之旅! 寸 点击在线生成引物,选择SYBR,让引物设计更精准。 选择物种,输入基因名称,粘贴刚才复制的序列,提交你的设计! 在引物设计列表中查看已提交的序列,等待奇迹出现吧!
𑠥騮᥅覔导从理论到实践! 引物设计的基本原则 选择目的基因的共有外显子区域进行设计。 引物长度建议在20到25bp之间,GC含量保持在40%到60%,Tm值最好在60℃左右。 设计引物时,尽量跨越外显子,上下游引物可以位于不同的外显子上。 引物的self complementarity和self 3' complementarity相加值应不超过8,单个值不超过5。 扩增产物长度建议在80到300bp之间,最佳为80到150bp。 避免设计含有4个或以上相同碱基(如AAAA、TTTT、GGGG、CCCC)的引物,以及避免明显的二级结构。 设计流程 寸 使用NCBI在线设计工具: 进入NCBI网站,搜索目的基因(如GAPDH)。 查看详细信息,找到共有外显子区域。 选择转录本信息,查看外显子位置。 进入引物设计页面,填写相关信息。 设置引物参数,如PCR产物大小、跨越外显子等。 点击“Get Primers”获取引物序列。 结果解读 在Graphical view of primer pairs部分查看每对引物跨越外显子的情况。 在Detailed primer reports部分查看引物质量和匹配情况。 通过以上步骤,你就可以轻松完成引物设计啦!
研0小白的引物设计之路:从零开始摸索实验 被引物设计困扰的一天 加入课题组已经三个月了,但我对实验流程的了解还不够深入。临近开学,我开始感到焦虑。最近,我决定尝试设计一个目的基因的引物,看看是否能得到一些结果。第一步就是订购引物。 实验的初步尝试 上午,我在小破站和百度上看了很多关于如何设计引物的教程,希望能找到最佳的引物设计方法。下午,我尝试使用各种在线工具来筛选和验证引物的特异性。我还向师兄师姐们请教了相关问题。尽管在订购环节遇到了小麻烦,因为周末生工不上班,但我还是学会了如何筛选和设计引物,这让我感到非常有成就感。 引物设计的方法总结 在ncbi.nlm.nih.gov网站上查询基因序列,选择human的基因,找到NM号,点击右侧的“pick primers”,设定产物大小为80-250bp(推荐80-150bp),Tm值设定为60℃,选择跨外显子,提交后会出现10个引物,选择长度在18-24bp之间,GC%在40%-60%之间,self complementarity小于5的引物进行blast验证。 在primerbank中查找已有的引物,然后进行blast验证。 使用primer3plus工具设计引物,需要从ncbi中复制CDS序列,设计出引物后进行blast验证。 젦夸来的实验计划 接下来,我将收集血标本进行mRNA测序,并学习数据分析方法,看看这个基因的选择是否合适。虽然今天被引物设计困扰了一天,但我也学到了很多新知识,这让我对接下来的实验充满了期待。
实验室必备:荧光素光谱查询网站推荐 探索荧光素的光谱世界,一个隐藏在实验室角落的宝藏网站! 直观展示发射光谱,帮助你预判荧光素之间的干扰。 网站功能强大,可以查询激发光谱和发射光谱,为你的实验提供有力支持。 网站特色: Combined Ex/Em Graph:结合激发和发射光谱图形,一目了然。 Reset Zoom:调整波长范围,方便查看不同波段的光谱。 Wavelength(nm):显示波长,帮助你精确定位。 Fluorochromes:列出各种荧光素,方便选择和查询。 Name:为每种荧光素提供名称,方便记忆。 QSearch Fluorochrome:快速搜索特定荧光素。 Save Combination:保存你常用的光谱组合,方便后续使用。 Clear:一键清除所有光谱,轻松开始新查询。 E:激发光谱,Em:发射光谱,Delete:删除不需要的光谱。 砥𗥥 𗦠功能: Fuorochromes Added:显示已添加的荧光素数量。 Alexa Fluor488:特定荧光素的详细信息。 Alexa Fluor647:更多荧光素的选择。 其他实验室工具网站推荐: 实验室没人告诉你的搜论文图片网站 实验室没人告诉你的引物网站 实验室没人告诉你的搜小分子药物网站 实验室没人告诉你的辅助综述网站 젥ꌦ巧合集: aqPCR合集 ImageJ合集 WB合集 石蜡切片和冰冻切片合集
챐CR引物设计全攻略✨ 想要进行qPCR实验,引物设计是关键一步!别担心,我们为你提供了详细的引物设计方法。 1️⃣ 选择合适的基因和种属:首先,你需要确定你想要检测的基因和实验动物种类。比如,如果你正在研究小鼠的某个基因,那么就选择小鼠作为种属。 2️⃣ 查找基因信息:通过NCBI等数据库,你可以轻松找到所需基因的详细信息。确保输入正确的基因名称和种属,然后点击搜索。 3️⃣ 进入引物获取界面:在NCBI等网站上,你可以找到“pickprimers”等选项,点击进入引物获取界面。在这里,你可以根据需要调整引物长度、产物长度等参数。 4️⃣ 选择合适的引物序列:在引物获取界面,你会看到多个引物序列供你选择。选择合适的引物序列是确保实验成功的重要一步。你可以根据引物序列的GC%、Self complementarity等指标来评估其质量。 5️⃣ 验证引物特异性:在购买引物后,一定要进行特异性验证。你可以通过琼脂糖凝胶电泳、测序等方法来验证引物的特异性。如果发现曲线不佳或存在非特异性扩增,则需要重新设计引物。 ᠥ騮ᥰ贴士: - 引物长度一般在18-25nt,太短可能导致非特异性高。 - 产物长度一般在80-200bp,太长可能影响实验效率。 - 前后引物的Tm值应尽量接近,一般选择58-62℃。 - GC%一般在40-60%之间,太高可能不易打开,效率低。 现在,你已经掌握了qPCR引物设计的全部流程!赶快试试吧!
生工PCR引物订购全攻略 嘿,大家好!今天我们来聊聊如何在生工订购PCR引物。这个过程其实挺简单的,但为了确保大家不踩坑,我会详细讲解一下。 订购前的准备工作슩斥 ,你得知道你要订购的基因序列。生工提供了多种引物类型,比如常规引物、NGS引物等等。记住,正链和反链是要分开订购的哦! 如何添加引物到购物车 这个步骤有点关键。你需要在生工的网站上找到“在线订购”部分,然后选择“添加引物”。接下来,你会看到一个页面让你输入引物的相关信息,比如名称、序列等等。填完这些信息后,点击“确定”,引物就会被添加到你的购物车里了。 购物车管理 如果你还想继续添加其他引物,可以在弹出的提示中选择“取消”,然后继续添加。全部添加完成后,选择“确定”并去结算。这里要注意的是,计量单位为OD时只支持干粉交付方式哦! 结算和支付𐊥訴騽橡⯼你可以看到所有引物的详细信息,包括单价、总价等等。确认无误后,选择“去结算”,然后按照提示完成支付。支付成功后,你的订单就正式生成了。 其他注意事项⚠️ 在订购过程中,如果有任何问题,可以随时联系生工的客服。他们会很乐意帮你解决问题。另外,记得查看积分优惠券,有时候可以省下不少钱哦! 好了,这就是在生工订购PCR引物的全部流程。希望对大家有所帮助!如果有任何问题,欢迎留言讨论!退
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