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如何设计grna设计网站解读_怎么设计grna(2024年12月精选)

内容来源：北京东为网络所属栏目：新闻更新日期：2024-12-01

如何设计grna设计网站

biorxiv 𐟓… 分享一个上个月在BioRxiv上发表的CRISPR knockin协议。这个协议从gRNA设计、同源臂设计、克隆到编辑和选择都有详细的指导。最棒的是，作者优化了一系列的质粒，包括各种荧光标签、表位标签和TurboID。这些质粒设计了许多实用的酶切位点，方便根据需要进行替换和选择标记。这些质粒都可以在Addgene上直接购买。简直不要太方便！ 𐟔砦„Ÿ谢Pelletier实验室，这对没有Knockin经验的学生来说真的是福音。如果你有Knockin的需求，强烈推荐看看这个协议。我自己还没用，等过一个月再来分享实际使用的感受！ 𐟓Š 协议的主要步骤包括：设计gRNA和同源臂克隆质粒细胞培养验证和选择 𐟛 ️ 具体操作包括：使用QIAGEN Plasmid Plus Midikit提取高质量的质粒DNA。通过PCR扩增qTAG cassette，并使用Gibson Assembly进行四片段组装。将组装好的质粒转入细菌中进行扩增，并使用QIAquick Gel Extraction Kit纯化质粒。将纯化后的质粒转入细胞中进行编辑，并通过PCR和测序验证编辑结果。 𐟓š 这个协议不仅提供了详细的步骤，还解释了每个步骤的目的和注意事项。无论你是初学者还是有一定经验的科研人员，这个协议都能帮助你顺利完成CRISPR Knockin实验。

代投sci文章

CRISPR筛选引领遗传干扰研究的新浪潮

CRISPR-Cas9：基因编辑新篇 CRISPR技术以其快速、精确和易于操作的特点，成为了当代科学的一大突破。这项技术源于对细菌自然防御机制的研究，细菌利用CRISPR系统来抵御病毒侵袭，通过精确剪切和替换DNA中的特定序列，形成了一种高效的免疫机制。 CRISPR-Cas9系统的关键发现归功于多位科学家的努力。除了美国加州大学伯克利分校的Jennifer Doudna教授和欧洲分子生物学实验室（EMBL）的Emmanuelle Charpentier教授外，还有哈佛大学和麻省理工学院的Broad Institute的Feng Zhang教授，他在将CRISPR技术应用于哺乳动物细胞方面做出了关键性的贡献，进一步扩展了CRISPR技术的应用范围。 CRISPR-Cas9系统由两个关键组成部分构成：一是“导向RNA”（gRNA），负责识别目标DNA序列；二是“Cas9酶”，负责剪切DNA。这两部分在伯克利分校的Doudna实验室和瑞典乌普萨拉大学的Charpentier实验室中被共同研发和优化。当它们协同工作时，能够在基因组的特定位置引入切口，实现精确的基因编辑。这一技术的发展不仅是基因编辑领域的一次重大进步，也为合成生物学带来了重要影响。合成生物学家利用CRISPR-Cas9系统的精确性，能够重新设计和构建生物系统，以实现更为复杂的生物功能。这包括了在能源生产、疾病治疗、环境保护等多个领域的应用。总的来说，CRISPR技术的发展象征着跨学科合作的成果，它不仅加深了我们对生命科学的理解，也为未来的生物技术研究和应用提供了新的方向。这一领域的研究工作持续吸引着全球众多科学家的关注和参与，推动了生物科学的革命性发展。

《微生物学报》2024年9期出版

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