当前位置：网站首页 » 导读 » 内容详情

sirna设计网站直播_sirna和mirna的区别图表(2024年12月全新视觉)

内容来源：北京东为网络所属栏目：导读更新日期：2024-11-30

sirna设计网站

直播预告｜解码siRNA：药物设计优化策略与体外药效评价精讲

揭秘DDX1与ATM，探索A-T奥秘 𐟔 实验目的：本实验旨在探究DDX1是否在ATM的调控下参与A-T患者成纤维细胞对氧化应激的响应。 𐟓Š 实验设计思路： 2.1 比较研究：通过比较A-T患者成纤维细胞（ATM基因突变）和正常成纤维细胞在氧化应激条件下的表现，来评估ATM和DDX1的功能。 2.2 功能丧失研究：通过敲低（siRNA技术）DDX1和ATM，研究它们在氧化应激中的单独和联合作用。 𐟏�ꌦ�ꤥ’Œ方法： 3.1 细胞培养和氧化应激诱导：细胞模型：使用A-T患者成纤维细胞（AT2BE和AT3BI）和正常成纤维细胞（GM38和GM10）。氧化应激诱导：使用钠砷酸盐（arsenite）处理细胞，模拟氧化应激条件。 3.2 DDX1和ATM的敲低：使用siRNA技术敲低DDX1和ATM，以研究它们在氧化应激中的作用。 3.3 ROS水平测量： ROS测量：使用H2DCF-DA和MitoSOX-Red荧光探针来定量细胞内ROS水平，评估氧化应激的程度。 3.4 RNA免疫沉淀（RIP）： RIP实验：利用抗DDX1抗体进行RNA免疫沉淀，以捕获与DDX1结合的RNA。 qRT-PCR分析：对沉淀的RNA进行qRT-PCR分析，以确定DDX1靶标RNA。 3.5 细胞存活和死亡分析： TUNEL实验：检测细胞凋亡。克隆形成实验：评估细胞在氧化应激后的长期存活能力。 3.6 细胞分离和RNA及蛋白水平测量：细胞分离：分离细胞质和核提取物，以测量特定RNA和蛋白的水平。 3.7 统计分析：使用Student’s t-test进行数据分析，以确定实验结果的统计显著性。 𐟓ˆ 实验结果预期： DDX1和ATM的功能：预期在ATM缺失的细胞中，DDX1对其靶标RNA的保护作用会减弱，导致细胞在氧化应激下的存活能力下降。氧化应激响应：预期在ATM和DDX1敲低的细胞中，ROS水平会升高，细胞死亡会增加。 𐟎ꌦ„义：通过这些实验，研究者能够揭示ATM和DDX1在A-T患者细胞中对抗氧化应激的复杂作用，以及这种作用如何影响细胞的生存和功能。这个实验设计通过多角度、多步骤的方法，全面评估了ATM和DDX1在氧化应激中的作用，为理解A-T的病理机制提供了重要的实验数据。

siRNA 转染效率不理想，背后原因是什么？

一分钟搞懂基因过表达、敲低、敲除的区别嘿，大家好！今天咱们来聊聊基因操作里的三个常见术语：过表达、敲低和敲除。别担心，只需要一分钟，你就能搞懂它们的区别啦！基因过表达 𐟚€ 基因过表达，简单来说，就是把一个基因插到一个表达载体里，然后把这个载体转染到目标细胞里。这样一来，细胞就会大量表达这个基因和它编码的蛋白质。常见的载体有哺乳动物载体（用于人、小鼠等哺乳动物细胞）、原核载体（用于大肠杆菌等原核生物）和慢病毒载体（比如HIV、FIV、SIV、EIA）。构建这些载体的方法包括设计目的基因片段和载体、连接元件（用酶切或gateway连接），然后通过病毒载体、电穿孔或转染试剂导入目标细胞。基因敲低 𐟛‘ 基因敲低呢，主要是用抑制剂来抑制基因的表达。常见的方法有RNA干扰技术（RNAi）、CRISPR-Cas9技术和gene转染技术。比如，siRNA载体通过与目标mRNA互补结合序列，特异性地实现靶向mRNA降解。而CRISPR载体则包含CRISPR靶向序列和转录抑制子。构建这些载体的步骤包括设计干扰序列、合成和克隆、转化和筛选，最后通过病毒等途径导入目标细胞。基因敲除 ✂️ 基因敲除则是用含有已知序列的小DNA片段与受体细胞基因组中序列相同或相近的基因发生同源重组，整合到受体细胞基因组中并得到表达的一种外源DNA导入技术。常见的载体有CRISPR/Cas9载体和TALENs载体。CRISPR/Cas9载体通过Cas9核酸酶和sgRNA靶向序列精确定位并靶向基因DNA序列，然后引入双链断裂点，完成基因敲除。而TALENs载体则包含特异性核酸酶和nuclease binding domain，通过切割靶向基因DNA序列，完成敲除和编辑。构建这些载体的方法包括设计和选择靶点、载体插入、转化和验证，最后通过病毒载体、电穿孔等方法导入目标细胞。总结 𐟓 总的来说，基因过表达、敲低和敲除这三种技术在生物学研究中有着广泛的应用。了解它们的原理和构建方法，可以帮助你更好地设计和执行实验。希望这篇文章能让你在短时间内对它们有个清晰的认识！如果你有任何问题或需要进一步的解释，欢迎在评论区留言哦！𐟘Š

siRNA转染实验步骤及要点详解 siRNA转染步骤：以EpFed转染试剂转染siRNA/质粒于24孔板，siRNA浓度为50nM为例。 1）储存液准备：siRNA使用前瞬时离心，用RNase-free H2O或灭菌ddH2O配制成20/L储存液，分装保存，避免反复冻融（建议不超过5次）。 2）细胞接种：贴壁细胞：转染前24小时接种0.5 - 2㗱05个细胞，转染时细胞融合度为30 - 50%。（铺板时要将细胞消化完全混匀，避免细胞堆积生长）悬浮细胞：转染前24小时接种0.5 - 2㗱05个细胞，转染时细胞数量应在4 - 8㗱05/孔。 3）转染步骤： A. 用25 ⵌ Opti-MEM（或不含抗生素和血清的DMEM培养基）稀释1.25⵬ siRNA（20/L储存液）/500ng质粒，并用枪轻轻吹打3 - 5 次混匀，再加入1.0 ⵌEpFed转染试剂，用枪轻轻吹打3 - 5 次混匀，不可Vortex或离心。siRNA转染细胞的终浓度为50 nM，室温孵育20分钟。 B. 按照24孔板每孔25ⵌ转染试剂-siRNA/质粒混合物，均匀加入到24孔细胞板中，前后轻摇细胞板混合均匀。 C. 细胞板置于37℃、5% CO2培养箱中培养48-72小时。对于某些细胞对EpFed转染试剂比较敏感，可以在转染后4-6小时更换细胞培养液，转染效率无显著影响。 4）效果检测：转染完成后48-72小时均可进行沉默/过表达效果检测，最佳检测时间与细胞类型、转染试剂、检测目的等相关。 siRNA基因沉默效率的常见测定方法和注意事项： QPCR检测：优先推荐QPCR检测RNA水平的沉默效果，推荐在24h到48h检测，可适当调整。QPCR检测沉默效果时，在设计引物时最好是将引物设计在沉默位点（靶序列）的两侧，而不是在同侧。因为RNAi引起的沉默是先进行mRNA的切割之后造成mRNA的降解。另外，即使设计在两侧，也不要离沉默位点（靶序列）太远的地方，不然可能会造成对沉默效果的低估。 WB检测：WB检测蛋白水平的沉默效果，一般在转染后48h到72h间提蛋白检测蛋白水平的沉默效果，检测时间跟目的蛋白的半衰期也有关系，具体的时间需要设计时间梯度，一般理想的是在72h最明显。

专栏内容推荐

800 x 578 · jpeg
siRNA Therapeutics: Current Status & Delivery System | Biopharma PEG
素材来自:biochempeg.com
600 x 442 · jpeg
siRNA从设计到实验系列（一） - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com

718 x 706 · jpeg
教程∣SiRNA设计从入门到精通，教会您如何筛选有效靶点！_Genbank
素材来自:sohu.com
2560 x 1440 · jpeg
Optimization of siRNA Design
素材来自:bocsci.com

1183 x 877 · png
【8.1】 siRNA 设计原则和药物开发中生物转化和处置 - Sam' Note
素材来自:qinqianshan.com
700 x 207 · jpeg
sirna是什么（siRNA是什么）_生物科学网
素材来自:jkwshk.tv

656 x 318 · png
教程∣SiRNA设计从入门到精通，教会您如何筛选有效靶点！_Genbank
素材来自:sohu.com

99 x 140 · jpeg
化学合成siRNA（siRNA设计方法） - 豆丁网
素材来自:docin.com
3508 x 2480 · jpeg
siRNA & ノックダウン | Proteintech Group | 抗体 & ELISAキット
素材来自:ptglab.co.jp

720 x 286 · png
实例讲解SiRNA设计，教你如何筛选有效靶点！ - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com

1157 x 842 · png
siRNA产品 - 北京德奥平生物技术有限公司
素材来自:dia-up.com
567 x 256 · jpeg
如何设计siRNA - 哔哩哔哩
素材来自:bilibili.com

1239 x 864 · jpeg
小白快速上手！siRNA的设计 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com
942 x 606 · jpeg
小白快速上手！siRNA的设计 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com

850 x 1105 · png
RNAi mechanism. siRNAs associated with RISC. Active RISC binds as well ...
素材来自:researchgate.net
1071 x 315 · png
如何设计siRNA - 哔哩哔哩
素材来自:bilibili.com

890 x 601 · gif
一种预测siRNA沉默效率的方法与流程
素材来自:xjishu.com
720 x 405 · jpeg
siRNA：从一个失败的实验到一个诺贝尔奖的故事 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com

567 x 203 · jpeg
如何设计siRNA - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com

850 x 912 · jpeg
Schematic Representation of the siRNA Screening Assay and Workflow (A ...
素材来自:researchgate.net
1974 x 375 · png
ExoRNA
素材来自:exornabio.com

1184 x 207 · jpeg
小白快速上手！siRNA的设计 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com

831 x 194 · jpeg
siRNA片段信息的设计方法 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com

600 x 134 · jpeg
小白快速上手！siRNA的设计 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com

450 x 538 · jpeg
siRNA——你不知道的那些小奥秘
素材来自:univ-bio.com
500 x 500 · jpeg
小核酸药物开发 siRNA ASO核酸药物序列设计脱靶分析靶点专利文献调研_aso核苷酸设计网站-CSDN博客
素材来自:blog.csdn.net

695 x 266 · jpeg
教程∣SiRNA设计从入门到精通，教会您如何筛选有效靶点！_Genbank
素材来自:sohu.com

545 x 817 · png
科学网—如何在线设计siRNA？ - 熊朝亮的博文
素材来自:blog.sciencenet.cn
600 x 461 · jpeg
小白快速上手！siRNA的设计 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com

342 x 277 · png
siRNA设计价格_品牌:transheep-丁香通官网
素材来自:biomart.cn
1080 x 607 · png
治疗性siRNA：最新进展和未来前景 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com

1600 x 1157 · jpeg
SiRNA:mRNA interaction stock illustration. Illustration of chemistry ...
素材来自:dreamstime.com
1080 x 777 · png
最高可达10亿美元，诺华收购siRNA初创，获3条临床前管线 - 基因治疗专区 - 生物谷
素材来自:news.bioon.com

800 x 1122 · jpeg
siRNA套餐全面升级
素材来自:ebiotrade.com
880 x 390 · jpeg
小白快速上手！siRNA的设计 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com

素材来自:查看更多內容

当前用户设备UA：Mozilla/5.0 AppleWebKit/537.36 (KHTML, like Gecko; compatible; ClaudeBot/1.0; +claudebot@anthropic.com)