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sirna设计网站直播_sirna转染步骤六孔板(2024年11月全新视觉)

内容来源：北京东为网络所属栏目：导读更新日期：2024-11-27

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直播预告｜解码siRNA：药物设计优化策略与体外药效评价精讲

揭秘DDX1与ATM，探索A-T奥秘 𐟔 实验目的：本实验旨在探究DDX1是否在ATM的调控下参与A-T患者成纤维细胞对氧化应激的响应。 𐟓Š 实验设计思路： 2.1 比较研究：通过比较A-T患者成纤维细胞（ATM基因突变）和正常成纤维细胞在氧化应激条件下的表现，来评估ATM和DDX1的功能。 2.2 功能丧失研究：通过敲低（siRNA技术）DDX1和ATM，研究它们在氧化应激中的单独和联合作用。 𐟏�ꌦ�ꤥ’Œ方法： 3.1 细胞培养和氧化应激诱导：细胞模型：使用A-T患者成纤维细胞（AT2BE和AT3BI）和正常成纤维细胞（GM38和GM10）。氧化应激诱导：使用钠砷酸盐（arsenite）处理细胞，模拟氧化应激条件。 3.2 DDX1和ATM的敲低：使用siRNA技术敲低DDX1和ATM，以研究它们在氧化应激中的作用。 3.3 ROS水平测量： ROS测量：使用H2DCF-DA和MitoSOX-Red荧光探针来定量细胞内ROS水平，评估氧化应激的程度。 3.4 RNA免疫沉淀（RIP）： RIP实验：利用抗DDX1抗体进行RNA免疫沉淀，以捕获与DDX1结合的RNA。 qRT-PCR分析：对沉淀的RNA进行qRT-PCR分析，以确定DDX1靶标RNA。 3.5 细胞存活和死亡分析： TUNEL实验：检测细胞凋亡。克隆形成实验：评估细胞在氧化应激后的长期存活能力。 3.6 细胞分离和RNA及蛋白水平测量：细胞分离：分离细胞质和核提取物，以测量特定RNA和蛋白的水平。 3.7 统计分析：使用Student’s t-test进行数据分析，以确定实验结果的统计显著性。 𐟓ˆ 实验结果预期： DDX1和ATM的功能：预期在ATM缺失的细胞中，DDX1对其靶标RNA的保护作用会减弱，导致细胞在氧化应激下的存活能力下降。氧化应激响应：预期在ATM和DDX1敲低的细胞中，ROS水平会升高，细胞死亡会增加。 𐟎ꌦ„义：通过这些实验，研究者能够揭示ATM和DDX1在A-T患者细胞中对抗氧化应激的复杂作用，以及这种作用如何影响细胞的生存和功能。这个实验设计通过多角度、多步骤的方法，全面评估了ATM和DDX1在氧化应激中的作用，为理解A-T的病理机制提供了重要的实验数据。

siRNA 转染效率不理想，背后原因是什么？

国自然研究方案关键技术全解析 𐟍š 米饭再美味，没有米也是白搭。同样，科研工作再精彩，没有合适的实验技术也是枉然。 𐟔 在撰写研究方案时，深入理解并掌握关键实验技术至关重要。这不仅能帮助你更好地把控研究方案，还能提升你的设计能力，让你在科研的舞台上游刃有余。 𐟌쯸 例如，你知道WB（Western Blot）实验的真正目的吗？它不仅仅是检测蛋白表达水平，还能定量计算蛋白丰度。那么，为什么还需要ELISA技术呢？因为它们各有千秋，相互补充。 𐟔砦Š€术之间是相互依赖的，没有一种技术可以完全替代另一种。因此，理解这些技术的原理、特点和实验目的，以及可能的实验结论，是创新和优化研究方案的关键。 𐟓 以下是国自然研究方案中常见的一些关键实验技术总结：检测RNA分子的空间分布和表达丰度：活细胞动态RNA成像技术、单分子RNA FISH原位杂交、多分子RNA Scope原位杂交技术、细胞核-细胞质分离结合qPCR、单细胞测序技术、空间转录组技术、Northern blot、dot blot等。检测蛋白分子的空间分布和表达丰度：免疫荧光、免疫组化、细胞核-细胞质分离结合WB、GFP标签融合蛋白示踪技术、空间蛋白质组学等。检测DNA拷贝数和突变：FISH原位杂交、qPCR、基因组测序等。检测蛋白分子总的表达量（不含空间信息）：ELISA技术（定量）、Western Blot技术（半定量，不准确）。检测蛋白分子的分子量大小（不含空间信息）：分子筛层析法、Western Blot技术、双向2D电泳、质谱分析等。检测蛋白分子的高级结构信息：蛋白结晶后冷冻电镜解析高级结构、分子对接分析等。分子表达干预技术：分子克隆操纵表达技术、病毒载体过表达或者敲减表达（shRNA、siRNA）、点突变技术、CRISPR敲除或者敲入技术、CRISPRi沉默技术、功能区分段（truncate）敲除技术、靶蛋白小分子抑制剂或者单抗抑制剂等。体内水平探索分子功能：类器官、PDX模型、裸鼠皮下成瘤、各种疾病动物模型、活体成像技术等。细胞功能探索：细胞增殖、细胞周期检测、细胞衰老、细胞干性、细胞分化、细胞凋亡、细胞焦亡、炎症风暴、迁移、侵袭能力，表面受体表达等。 𐟚€ 在选择关键技术时，务必量力而行，确保符合你所在实验室的硬件设施和技术水平。避免为了追求新颖而脱离实际，评审专家会对此提出质疑。 𐟌Ÿ 掌握这些关键技术，你的研究方案将更加全面和深入，为科研工作的成功打下坚实基础。

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